Purificacion y caracterisacion de glutation S-transferasas de trucha arcos iris. Estudio experimental para su aplicacion como biomarcadores potentiales de contaminacion medioambiental - Archive ouverte HAL Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2018

Purificacion y caracterisacion de glutation S-transferasas de trucha arcos iris. Estudio experimental para su aplicacion como biomarcadores potentiales de contaminacion medioambiental

Purification et caractérisation des glutathion S-transférases de la truite arc-en-ciel. Étude expérimentale pour son application en tant que biomarqueurs potentiels de contamination environnementale

Patrick Rouimi

Résumé

Las enzimas de biotransformación constituyen uno de los mecanismos de defensa del organismo, destinadas a favorecer la metabolización de los xenobióticos, transformándolos en compuestos más hidrosolubles, y por tanto, más fácilmente excretables al medio. Dentro de estas enzimas, nos encontramos las Glutatión S-Transferasas (GST), formas diméricas ampliamente distribuidas en la naturaleza, y que catalizan la conjugación del tripéptido Glutation con una gran variedad de xenobióticos que poseen centros electrofilicos en su estructura. Cada dia es mayor el interés por realizar una completa purificación y caracterización de estas formas enzimáticas en diversas especies de peces, por el importante papel que podrían desempeñar como posibles biomarcadores de contaminación medioambiental. Por tanto, los objetivos del presente trabajo serán fundamentalmente tres: - Purificar y caracterizar adecuadamente las formas citosólicas de GST existentes en cuatro órganos de trucha arco iris: higado, riñón, branquias y epitelio olfatorio. - Purificar y caracterizar las formas citosólicas de GST existentes en hepatocitos aislados en fresco procedentes de esa misma especie animal, como paso fundamental para lograr validar el empleo de los métodos in vitro en estudios de ecotoxicología. - Estudiar la existencia de un fenómeno de inducción enzimática provocado por una mezcla comercial de unos importantes xenobióticos medioambientales como son los Bifenilos Policlorados, PCBs. Los resultados obtenidos permitieron determinar la existencia de 5 subunidades diferentes de las enzimas GST citosólicas, presentes en los cuatro órganos estudiados, pero variando el nivel de expresión en cada uno de ellos. La identificación de la secuencia aminoacídica de la fracción aminoterminal de dos de estas subunidades, unido a los valores correspondientes a la masa molecular, permitió establecer que se trataba de formas pert
Les enzymes de biotransformation sont l'un des mécanismes de défense de l'organisme, conçus pour favoriser le métabolisme des xénobiotiques, en les transformant en composés plus solubles dans l'eau, et donc plus facilement excrétés dans l'environnement. Au sein de ces enzymes, on trouve les Glutathion S-Transferases (GST), des formes dimères largement distribuées dans la nature, et qui catalysent la conjugaison du tripeptide Glutathion avec une grande variété de xénobiotiques qui ont des centres électrophiles dans leur structure. Chaque jour, il y a un intérêt accru à effectuer une purification et une caractérisation complètes de ces formes enzymatiques chez diverses espèces de poissons, en raison du rôle important qu'elles pourraient jouer en tant que biomarqueurs possibles de la contamination environnementale. Par conséquent, les objectifs du présent travail seront fondamentalement trois : - Purifier et caractériser adéquatement les formes cytosoliques de GST existant dans quatre organes de la truite arc-en-ciel : foie, rein, branchies et épithélium olfactif. - Purifier et caractériser les formes cytosoliques de GST existant dans les hépatocytes fraîchement isolés de la même espèce animale, étape fondamentale pour valider l'utilisation des méthodes in vitro dans les études d'écotoxicologie. - Etudier l'existence d'un phénomène d'induction enzymatique provoqué par un mélange commercial de xénobiotiques environnementaux importants tels que les biphényles polychlorés, les PCB. Les résultats obtenus ont permis de déterminer l'existence de 5 sous-unités différentes des enzymes GST cytosoliques, présentes dans les quatre organes étudiés, mais avec des niveaux d'expression différents dans chacun d'eux. L'identification de la séquence en acides aminés de la fraction amino-terminale de deux de ces sous-unités, ainsi que les valeurs correspondant à la masse moléculaire, ont permis d'établir qu'il s'agissait de formes pert.
Fichier non déposé

Dates et versions

tel-03824401 , version 1 (21-10-2022)

Identifiants

  • HAL Id : tel-03824401 , version 1

Citer

Patrick Rouimi. Purificacion y caracterisacion de glutation S-transferasas de trucha arcos iris. Estudio experimental para su aplicacion como biomarcadores potentiales de contaminacion medioambiental. Life Sciences [q-bio]. Universidade de Santiago de Compostela (Spain), 2018. Español. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-03824401⟩
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