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Communication Dans Un Congrès Année : 2023

Contribution of epitranscriptomics in the characterization of chondrogenic differentiation of synovial fluid MSCs

Apports de l’epitranscriptomique dans la caracterisation de la differenciation chondrogenique de CSMs du liquide synovial

Résumé

L’ingénierie tissulaire est une voie thérapeutique encourageante pour le traitement des lésions focales du cartilage. Les cellules stromales mésenchymateuses (CSMs), notamment celles issues du liquide synovial (CSMs-LS) sont une alternative prometteuse aux chondrocytes dont le prélèvement est invasif et dont la capacité de prolifération est limitée. Les CSMs-LS sont aisément accessibles et ont de très bonnes capacités de différenciation chondrogénique après traitement par des facteurs de croissance de la superfamille des TGF. Cette différenciation, peut cependant se poursuivre vers une dérive hypertrophique, menant à l’ostéogenèse. Il est donc primordial d’identifier de nouveaux marqueurs de cette différenciation chondrogénique. L’objectif de notre projet de recherche était de réaliser le suivi de la différenciation chondrogénique des CSMs-LS en comparaison avec les chondrocytes au sein de substituts cartilagineux. L’analyse des modifications épitranscriptomiques des ARNr des CSMs au cours de leur différenciation pourrait permettre d’identifier des marqueurs de dérive hypertrophique. Nous avons réalisé des substituts cartilagineux à partir d’éponges de collagène ensemencées avec soit des CSMs-LS soit des chondrocytes. Les substituts ont été traités pendant 7, 14, 21, 28 et 56 jours avec ou sans inducteur chondrogénique (ITS VS TGF-bêta1). A chaque temps, les substituts ont été caractérisés par RT-qPCR (marqueurs chondrogéniques, hypertrophiques et ostéogéniques), en histologie (HES, Rouge Sirius, bleu alcian) et immunohistochimie (COL II). Ces analyses ont été complétées par une cartographie des 2’O méthylations des ARNr. Les données obtenues ont été comparées à un pool de chondrocytes à P0 servant de référence de différenciation chondrogénique des cellules. L’analyse de l’expression des gènes montre une augmentation de l’expression des marqueurs chondrogéniques sous l’effet du TGF-bêta1 pour les deux types cellulaires. Le marqueur d’hypertrophie COL10A1 reste faiblement exprimé jusqu’à J28 pour les deux types cellulaires mais augmente à J56 pour les CSMs-LS. Les marqueurs ostéogéniques restent faiblement exprimés dans toutes les conditions. Les analyses histologiques et immunohistochimiques ont montré une matrice extracellulaire dense et homogène pour les deux types cellulaires. Les analyses épitranscriptomiques montrent que les chondrocytes et les CSMs-LS en biomatériau ont des ARNr plus fortement méthylés en condition ITS qu’en condition TGF-bêta1 à J7. Après J7, le taux de méthylation des ARNr des cellules traitées au TGF-β1 a augmenté au fil du temps, atteignant des niveaux similaires à ceux en condition ITS à J56. Nous avons également identifié 5 sites différentiellement méthylés entre les deux types cellulaires. Le RiboMethSeq nous a permis de mettre en lumière des marqueurs potentiels de la différenciation chondrogénique. Remerciements : ces travaux ont été réalisés grâce au soutien de la Société Française de Rhumatologie.
présentation JFBTM Kevin Bourge.pdf (1.67 Mo) Télécharger le fichier
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)

Dates et versions

hal-04120387 , version 1 (07-06-2023)

Identifiants

  • HAL Id : hal-04120387 , version 1

Citer

Kevin Bourge, Christel Henrionnet, Virginie Marchand, Didier Mainard, Damien Loeuille, et al.. Apports de l’epitranscriptomique dans la caracterisation de la differenciation chondrogenique de CSMs du liquide synovial. 23èmes Journées Françaises de Biologie des Tissus Minéralisés, Société Française de Biologie des Tissus Minéralisés, May 2023, Sète, France. ⟨hal-04120387⟩
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