Identification de facteurs modulant le repliement de la glycoprotéine du virus rabique - Archive ouverte HAL Accéder directement au contenu
Thèse Année : 2001

Identification of factors modulating the folding of rabies virus glycoprotein

Identification de facteurs modulant le repliement de la glycoprotéine du virus rabique

Résumé

Rabies virus (VR) glycoprotein (G) forms spicules at the surface of virions. These spicules have the shape of a globular mass at the tip of a rod. They ensure the attachment of the VR to its target cell and, following the endocytosis of the VR, the protonation of G causes conformational rearrangements which cause the membrane of the virus to merge with that of the cell. The folding of G ectodomain was studied along two axes. The first consisted in characterizing the effect of the transmembrane anchoring domain (DTM) on the structure of the ectodomain of G during its biosynthesis. Different types of membrane anchors have been attached to the ectodomain and ectodomain structure has been probed using monoclonal antibodies. This has allowed us to show that the DTM ensures an optimal distance between the ectodomain and the membrane, otherwise, the protein folds into an alternative form. We thus suggest that a segment of G ectodomain interacts with the membrane and that this interaction is necessary for native folding. In addition, motifs whose mutation also causes alternative folding have been identified in the juxtamembrane region (His-Pro / 397-398 and Asp-Glu-Ala-Glu-Asp / 410-414). The second axis of the structural study of G consisted in analyzing the structure of two peptides corresponding to this region, produced in bacteria, using different spectroscopic techniques. This study has shown that their structure depends on external factors. It could be another region of the protein and / or the membrane. In the third part, a test allowing to follow the fusion of transfected cells was developed. This has supported the functional characterization of all the mutants produced and to specify the role of different domains of G in the membrane fusion process.
La glycoprotéine (G) du virus rabique (VR) forme des spicules à la surface des virions. Ces spicules ont la forme d'une masse globulaire portée par une tige. Elles assurent l'attachement du VR à sa cellule cible et, à la suite de l'endocytose du VR, la protonation de G entraîne des réarrangements conformationnels qui provoquent la fusion de la membrane du virus avec celle de la cellule. Le repliement de l'ectodomaine de G a été étudié selon deux axes. Le premier a consisté à caractériser l'effet du domaine d'ancrage transmembranaire (DTM) sur la structure de l'ectodomaine de G lors de sa biosynthèse. Différents types d'ancrage à la membrane ont été attachés à l'ectodomaine et la structure de celui-ci a été caractérisée à l'aide d'anticorps monoclonaux. Cela nous a permis de montrer que le rôle du DTM est d'assurer une distance optimale entre l'ectodomaine et la membrane, faute de quoi, la protéine se replie sous une forme alternative. Nous en avons déduit qu'un segment de l'ectodomaine de G interagit avec la membrane et que cette interaction est nécessaire pour l'acquisition de sa conformation native. Par ailleurs des motifs dont la mutation provoque aussi un repliement alternatif ont été identifiés dans la région juxtamembranaire (His-Pro/397-398 et Asp-Glu-Ala-Glu-Asp/410-414). Le deuxième axe de l'étude structurale de G a consisté à analyser la structure de deux peptides correspondant à cette région, produits en bactéries, à l'aide de différentes techniques spectroscopiques. Cette étude a montré que leur structure dépend de facteurs extérieurs. Il pourrait s'agir d'une autre région de la protéine et / ou de la membrane. Dans une troisième partie, un test permettant de suivre la fusion de cellules transfectées a été mis au point. Ceci nous a permis de caractériser de façon fonctionnelle l'ensemble des mutants réalisés et de préciser le rôle de différents domaines de G dans la fusion membranaire qu'elle induit.
Fichier principal
Vignette du fichier
Maillard_manuscrit de thèse.pdf (10.1 Mo) Télécharger le fichier
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)
Loading...

Dates et versions

tel-02409106 , version 1 (13-12-2019)

Identifiants

  • HAL Id : tel-02409106 , version 1

Citer

Antoine P. Maillard. Identification de facteurs modulant le repliement de la glycoprotéine du virus rabique. Sciences du Vivant [q-bio]. Université Pierre et Marie Curie (Paris 6), 2001. Français. ⟨NNT : ⟩. ⟨tel-02409106⟩
77 Consultations
55 Téléchargements

Partager

Gmail Facebook X LinkedIn More