Development of a method for quantitative profiling of the carnitine family by LC-HRMS - Archive ouverte HAL
Poster De Conférence Année : 2023

Development of a method for quantitative profiling of the carnitine family by LC-HRMS

Résumé

L-carnitine plays an essential role in tissue energy metabolism by transporting long-chain fatty acids (FAs) across the inner membrane of the mitochondria. The mitochondrial membrane is impermeable to long-chain fatty acids (12 to 20C) and L-carnitine is the only transporter that allows them to enter the mitochondria. The FAs, activated into Acyl-CoA, are converted into acylcarnitine and thus cross the mitochondrial membrane, with the action of three enzymes. Once in the mitochondria, the FAs, once again in the form of Acyl-CoA, undergo β-oxidation, the major role of which is to supply ATP to organs with high energy requirements. This metabolic pathway is a key player in metabolism. This poster presents the implementation of an extraction and quantitative analysis method specific to the carnitine family: from L-carnitine to C18:1 acylcarnitine, using liquid chromatography coupled to an orbitrap-type mass spectrometer (Thermo Exploris 240). Initial extraction tests were carried out on tissues and plasma, as well as a separation on a Waters Acquity HSS T3 column. Various deuterated internal standards (of varying chain lengths) were used for absolute quantification. The method will be validated. This new profiling will be offered as a service on MetaToul, but it will mainly be used to monitor these partially 13C-labelled compounds as part of metabolic labelling experiments. It will be an important complement to the profile of labelled FAs already on offer.
La L-carnitine joue un rôle essentiel au niveau du métabolisme énergétique des tissus via le transport des acides gras (AG) à chaîne longue à travers la membrane interne de la mitochondrie. Cette dernière est imperméable aux AG à chaîne longue (12 à 20C) et la L-carnitine est l’unique transporteur leur permettant de pénétrer au sein de la mitochondrie. Les AG, activés en Acyl-CoA, sont convertis en acylcarnitine et traversent ainsi la membrane mitochondriale, avec l’action de trois enzymes. Une fois dans la mitochondrie, les AG, à nouveau sous forme d’Acyl-CoA, vont subir la β -oxydation, dont le rôle majeur est la fourniture d’ATP aux organes à forts besoins d’énergie. Cette voie métabolique est un acteur clé en métabolisme. Ce poster présente la mise en place d’une méthode d’extraction et d’analyse quantitative spécifiques de la famille des carnitines : de la L-carnitine jusqu’à l’acylcarntine C18:1, par chromatographie liquide couplée à un spectromètre de masse de type orbitrap (Thermo Exploris 240). Des premiers tests d’extraction ont été réalisés sur tissus et plasma ainsi qu’une séparation sur colonne Waters Acquity HSS T3. Différents étalons internes deutérés (de longueurs de chaines variés) ont été utilisés pour faire les quantifications absolues. Une validation de la méthode sera effectuée. Ce nouveau profilage sera proposé en prestations sur MetaToul mais il sera surtout décliné pour suivre ces composés partiellement marqués au 13C dans le cadre d’expérimentation de marquage métabolique. Il sera un complément important au profil d’AG marqués déjà proposé.
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Dates et versions

hal-04406276 , version 1 (19-01-2024)

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Identifiants

  • HAL Id : hal-04406276 , version 1

Citer

Océane Delos, Pauline Le Faouder, Floriant Bellvert, Jean-Charles Portais, Justine Bertrand-Michel. Development of a method for quantitative profiling of the carnitine family by LC-HRMS. RFMF, May 2023, Perpignan, France. ⟨hal-04406276⟩
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