Contexte Les sous-produits de médicaments (SP) sont un sujet de préoccupation croissante, car ils ont des impacts inconnus sur la santé humaine et les écosystèmes. Leur toxicité dépasse parfois celle de leurs molécules mères et est mal documentée, rendant leur détection et leur évaluation toxicologique difficiles. L’objectif de cette étude était de dévoiler des biomarqueurs potentiels de maladies, de voies et de processus biologiques susceptibles de se produire suite à une exposition au furosémide, un diurétique largement utilisé, et à ses métabolites chez l’Homme (pyridinium du furosémide (PoF), saluamine (SAL), furfural (FRF), encore mal caractérisés. Méthodes Les EC50 de FUR, PoF, SAL FRF et de leur mélange (MIX) ont été déterminées à 96h. Une analyse protéomique a été réalisée sur la lignée cellulaire humaine d’hépatocarcinome Hep-G2 exposée aux métabolites et à leur mélange à l’EC10. Les protéines des cellules Hep-G2 exposées ont été extraites, digérées par un mélange trypsine/Lys-C avant une analyse LC-MSE (NanoAcquity-ESI-SynaptG2-Si). Résultats Parmi 1692 protéines identifiées et 1379 quantifiées, 71, 101, 138, 205 et 34 protéines dérégulées ont été identifiées après l’exposition à FUR, PoF, SAL, FRF et MIX, respectivement. La plupart étaient sur-exprimée, sauf dans le cas du MIX, où l’inverse a été observé. Suite à l’exposition au FUR, peu de corrélations à des pathologies ont été mises en évidence par l’analyse d’enrichissement de gene ontology, en accord avec sa faible toxicité. Cependant, alors que des liens possibles avec certaines pathologies (cancers hépatiques et autres maladies du foie...) ont été mis en évidence après l’exposition aux 3 métabolites, ceux-ci n’ont pas été retrouvés pour le MIX, ce qui suggère des effets antagonistes possibles. Conclusions Ce travail contribue à améliorer les connaissances actuelles des SP du furosémide et de leur mélange, ainsi que leurs impacts possibles sur la santé humaine. Au-delà du cas du furosémide, notre étude souligne la nécessité de mieux prendre en compte les SP médicamenteux lors de l’évaluation des risques toxicologiques.