Une nouvelle mutation de la tubuline β1 associée à un profil prothrombotique dépendant de l’axe GPVI et de la sécrétion
Résumé
Introduction Les microtubules (MTs), constitués de tubuline α et β, jouent un rôle crucial dans la biogenèse des plaquettes et leur morphologie. Jusqu’à présent, les mutations de la tubuline β1 (TUBB1) étaient associées à des macrothrombopénies et sans rôle clair dans la fonction plaquettaire. Récemment, une nouvelle mutation de TUBB1 (p.P160L) associée à des macroplaquettes et une hyperactivation plaquettaire, mais sans thrombopénie, a été mise en évidence chez des patients atteints de dysgénésie thyroïdienne.1 Objectif Caractériser l’impact de cette nouvelle mutation de TUBB1 sur la fonction plaquettaire et la morphologie des plaquettes. Méthodologie Les fonctions plaquettaires d’un modèle murin « knock-in » porteur de la mutation p.P160L ont été évaluées in vivo et in vitro chez les souris contrôles (WT), hétérozygotes (HET) et homozygotes (KI). Résultats Activation plaquettaire augmentée : par cytométrie de flux, l’activation de l’intégrine αIIbβ3 est significativement augmentée en réponse à la convulxine, un ligand activateur de GPVI, un récepteur au collagène (HET: 39 ± 3% ; KI: 123 ± 4% ; p<0,001), mais est normale à l’ADP et la thrombine. L’inhibition des voies d’amplification, médiées par l’ADP et le thromboxane A2, restaure une activation normale de l’intégrine. L’exposition de P-sélectine, un marqueur de sécrétion, est significativement augmentée (HET: 20 ± 3% ; KI: 53 ± 3% ; p<0,001) par rapport à WT en réponse à la convulxine. Ces résultats suggèrent un impact de la mutation p.P160L sur l’activation plaquettaire dépendante de l’axe GPVI et de la sécrétion. Profil prothrombotique : une agrégation plaquettaire augmentée est observée en réponse au collagène chez les souris HET et KI par rapport à WT (agrégation : WT: 22% ; HET: 49% ; KI: 69%), mais est normale en réponse à l’ADP. Lorsque le sang est perfusé in vitro dans une chambre de perfusion sur matrice de collagène à un taux de cisaillement artériolaire, les thrombi HET et KI ont une taille significativement augmentée par rapport à WT (moyenne de fluorescence : WT: 233 ± 19 UA ; HET: 460 ± 76 UA ; KI: 482 ± 66 UA ; p<0,05). Par ailleurs, dans un modèle de thrombose in vivo, le temps d’occlusion est significativement réduit dans les artérioles des souris HET et KI (WT: 38 ± 4 min ; HET: 25 ± 2 min ; KI: 22 ± 2 min ; p<0,01). Ces résultats suggèrent que la mutation p.P160L est associée à un profil prothrombotique. Désorganisation des MTs : par microscopie électronique à transmission, les plaquettes des souris HET et KI sont arrondies et les MTs de leur bande marginale sont désorganisés. Par western blot, l’expression de TUBB1 est significativement (p<0,01) diminuée de 23 ± 4% chez HET et 43 ± 5% chez KI par rapport à WT. Après sédimentation des MTs par ultracentrifugation, le taux de TUBB1 incorporée dans les MTs est significativement diminué (p<0,05) de 34% chez HET et 58% chez KI par rapport à WT. Ces résultats indiquent que la mutation p.P160L perturbe le réseau de MTs et la morphologie plaquettaire. Conclusion Pour la première fois, nous mettons en évidence qu’une mutation de la TUBB1 peut être associée à un risque prothrombotique dépendant de l’axe GPVI et de la sécrétion, probablement dû à une désorganisation des MTs. Conflits d’intérêts : aucun 1 Stoupa A et al. TUBB1 mutations cause thyroid dysgenesis associated with abnormal platelet physiology. EMBO Mol Med. 2018;10:e9569