Introduction : Les bactéries du genre Mycoplasma sont de petites bactéries sans paroi dont lediagnostic est rendu complexe de par leur croissance fastidieuse et le peu de voiesmétaboliques exprimées. Pourtant plus de cent espèces ont été décrites, qu’elles soientcommensales, opportunistes ou pathogènes, avec un tropisme essentiellement urogénital ourespiratoire pour ces dernières Chez les chevaux, trois espèces, Mycoplasma (M.) equirhinis,M. pulmonis et M. felis, ont été détectées de façon récurrente dans des prélèvementsrespiratoires1,2. Leur présence est suspectée par les vétérinaires chez les chevaux présentantune toux chronique et en absence de réponse après un traitement antibiotique3. Cependant, l'implication des mycoplasmes dans les troubles respiratoires chez le cheval n'est pas clairement documentée4. Parmi les échantillons respiratoires équins (lavages bronchoalvéolaires [LBA] et majoritairement lavages trachéaux [LT]), analysés au laboratoire, 15% paran se sont révélés positifs par PCR en temps réel (rt-PCR) à Mycoplasma spp. Cependant, lesespèces associées n'ont pas encore été explorées. Objectifs : Cette étude vise à i) développeret valider des outils pour détecter, isoler et identifier les différentes espèces de Mycoplasmadans les échantillons cliniques respiratoires équins et ii) définir ensuite leur prévalence enFrance en fonction du type de prélèvement et des caractéristiques des chevaux (âge, sexe etrace). Matériel et méthodes : Des échantillons négatifs dopés avec des souches dénombrées(M. equirihinis, felis et pulmonis) et/ou une gamme de dilution d'ADN ont été utilisés pourcaractériser les méthodes de culture et de rt-PCR. La prévalence des espèces de mycoplasmea été déterminée sur une population de 630 chevaux, prélevés en France en 2020, etprésentant des troubles respiratoires. Les souches isolées et les extraits d'ADN positifs ont étéidentifiés par séquençage de l'ARNr 16S ou par PCR spécifique d'espèce. Résultats : Nosméthodes (culture et PCR permettent de détecter de façon équivalente), à partird’échantillons qualifiés, les trois espèces de mycoplasmes respiratoires équines. Sur notrepanel test, cent-sept chevaux (17%) sont positifs au genre Mycoplasma spp. par au moins unedes deux méthodes utilisées. Les mycoplasmes sont davantage détectés dans les LT (19,5%)que dans les LBA (8,4%). L'espèce M. equirhinis est retrouvée dans 81% des échantillonspositifs par rt-PCR et 98% des 43 souches isolées. Discussion et Conclusion : La prévalence desmycoplasmes dans les échantillons respiratoires est confirmée et affinée. M. equirhinis estl'espèce prédominante. Sa prévalence varie selon le type d'échantillon, l'âge et la conditiond’athlète du cheval.