Value of HPLC and fluorescent pteridines in estimating the age of Anopheles gambiae adults
Intérêt de l’HPLC et des ptéridines fluorescentes pour estimer l’âge d’anophèles adultes de l’espèce Anopheles gambiae
Résumé
Fluorescent pteridines are photosensitive pigments of mosquito cuticle. Their quantity decreases with time during the adult life of mosquitoes. In order to test the feasibility of the reversed-phase HPLC (High Pressure Liquid Chromatography) technique, to measure pteridine fluorescence and to estimate the calendar age, reared Anopheles gambiae of known age are used. Head and thorax were studied on mosquitoes aged 0, 5, 10, 20 days after emergence. There was significant difference between male and female of 0 and 5 days of age; the difference was not significant at 10 days of age. The level of fluorescence between a female's head and thorax non separated does not differ from the sum of fluorescence level of separated head and thorax. Pteridin fluorescent of female's head and thorax does not correlate. It decreases significantly with chronological age between 0 and 5 days either for head + thorax or for head alone. Conversely, this fluorescence quantity is weak and maintained constant beyond 5 days. The use of thorax alone of the female mosquito allows the differentiation of mosquito aged less than 5 days, between 5 and 10 days and aged more than 10 days. Reversed-phase HPLC technique, at least in the way we have demonstrated, does not appear sensitive enough to estimate the age of the species An. gambiae reared in an insectarium. It seems that this technique, relatively complex to manage, does not bring a substantial advantage compared to the method of Detinova, which allows the separation of nulliparous and parous females (i.e. < or = 3 days versus > 3 days).
Les ptéridines fluorescentes sont des pigments photosensibles de la cuticule des moustiques. Leur quantité diminue avec le temps au cours de la vie imaginale. Afin de tester la faisabilité de la technique HPLC (High Pressure Liquid Chromatography) en phase réverse pour mesurer la quantité de ptéridine fluorescente et pour en déduire l’âge des moustiques, on a utilisé des spécimens d’Anopheles gambiae élevés en insectarium et d’âge connu. Tête et thorax, ensembles ou séparés, ont été étudiés sur des moustiques âgés de 0, 5, 10 et 20 jours. Les moustiques mâles et femelles montrent une différence significative à 0 et 5 jours; à 10 jours la différence n’est plus significative. Chez les femelles, le niveau de fluorescence entre tête et thorax ensemble ne diffère pas de la somme de niveau de fluorescence de tête et thorax séparés. La corrélation entre la fluorescence de la tête et celle du thorax n’est pas significative. La diminution du niveau de fluorescence en fonction de l’âge a été significative entre 0 et 5 jours que ce soit pour l’ensemble tête + thorax ou pour tête seule. Au contraire, au-delà de 5 jours, la quantité de fluorescence est faible et se maintient en plateau. L’utilisation du thorax seul des femelles permet la séparation en moustiques âgés de moins de 5 jours, âgés entre 5 et 10 jours, et âgés de plus de 10 jours. La technique HPLC n’apparaît pas assez sensible pour estimer l’âge d’Anopheles gambiae élevés à l’insectarium. Il ne semble pas que cette technique, relativement complexe à mettre en œuvre, apporte un avantage substantiel par rapport à la méthode classique de Detinova permettant de séparer les femelles en nullipares et pares (i.e. ≤ 3 jours versus >3 jours).