Article Dans Une Revue Chemistry and Physics of Lipids Année : 2019

Detergent-free solubilization of human Kv channels expressed in mammalian cells

M G Karlova
  • Fonction : Auteur
N Voskoboynikova
  • Fonction : Auteur
G S Gluhov
  • Fonction : Auteur
D Abramochkin
  • Fonction : Auteur
O A Malak
  • Fonction : Auteur
A Mulkidzhanyan
  • Fonction : Auteur
H.-J Steinhoff
  • Fonction : Auteur
K V Shaitan
  • Fonction : Auteur
O S Sokolova
  • Fonction : Auteur
  • PersonId : 1046019

Résumé

Styrene-maleic acid (SMA) copolymers are used to extract lipid-encased membrane proteins from lipid bilayers in a detergent-free manner, yielding SMA lipid particles (SMALPs). SMALPs can serve as stable water-soluble nanocontainers for structural and functional studies of membrane proteins. Here, we used SMA copolymers to study full-length pore-forming α-subunits hKCNH5 and hKCNQ1 of human neuronal and cardiac voltage-gated potassium (Kv) channels, as well as the fusion construct comprising of an α-subunit hKCNQ1 and its regulatory transmembrane KCNE1 β-subunit (hKCNE1-hKCNQ1) with added affinity tags, expressed in mammalian COS-1 cells. All these recombinant proteins were shown to be functionally active. Treatment with the SMA copolymer, followed by purification on the affinity column, enabled extraction of all three channels. A DLS experiment demonstrated that Negative stain electron microscopy and single particle image analysis revealed a four-fold symmetry within channel-containing SMALPs, which indicates that purified hKCNH5 and hKCNQ1 channels, as well as the hKCNE1-hKCNQ1 fusion construct, retained their structural integrity as tetramers.

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hal-02109357 , version 1 (24-04-2019)

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Citer

M G Karlova, N Voskoboynikova, G S Gluhov, D Abramochkin, O A Malak, et al.. Detergent-free solubilization of human Kv channels expressed in mammalian cells. Chemistry and Physics of Lipids, 2019, ⟨10.1016/j.chemphyslip.2019.01.013⟩. ⟨hal-02109357⟩
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