Contribution de la LC-ESI-MS-MS à l’analyse de séquences d’oligomères de la 2,5-diméthylaniline
Résumé
Les laccases fongiques sont des oxidases exocellulaires impliquées dans de nombreuses réactions de biotransformation de produits naturels (matériaux ligno-cellulosiques) ou xénobiotiques (pesticides, polluants industriels et domestiques…). De ce fait, elles présentent un grand intérêt sur le plan biotechnologique. Pour développer de telles applications comme pour réaliser les études structurales de ces enzymes, il est nécessaire de disposer de fortes quantités d’enzymes. L’induction par des composés chimiques est un moyen classique pour aboutir à cette hyperproduction. La 2,5-diméthylaniline est un inducteur utilisé depuis plusieurs décennies mais son mode d’action est toujours inconnu. Cependant, il semble exister un lien entre la métabolisation de la 2,5-diméthylaniline, caractérisée par une forte coloration rouge des cultures fongiques, et son pouvoir inducteur. Notre objectif est donc dans un premier temps d’identifier les produits de transformation de la 2,5-diméthylaniline.
Les différents métabolites de la 2,5-diméthylaniline ont été extraits du milieu de culture et soumis à un fractionnement chromatographique. Les composés isolés comportent 2 à 5 unités aromatiques (diméthylaniline, diméthylphényle, diméthyl-iminobenzoquinone ..). Leur structure a été établie par IR, UV, RMN 13C, 1H et spectrométrie de masse.
La LC-ESI-MS-MS a permis d'établir sans ambiguïté la séquence des métabolites de plus haute masse. L’étude de la décomposition des molécules protonées en balayage d’énergie de collision (instrumentation quadripôlaire) a mis en évidence des processus « basse énergie » et « haute énergie » conduisant respectivement à des espèces à nombre impair ou pair d’électrons. Ces ions-diagnostic résultant d’une multiplicité de sites de protonation en compétition rendent compte de tout ou partie de la séquence des oligomères étudiés. Cette réactivité est mise à profit pour la différenciation de structures isomères comportant cinq unités aromatiques.
Domaines
Sciences du Vivant [q-bio]
Origine : Fichiers produits par l'(les) auteur(s)