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            <title xml:lang="en">Mise en évidence par immunolocalisation en microscopie confocale et en microscopie électronique à transmission de la lipase gastrique lors de l'hydrolyse du globule gras bovin</title>
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              <p>Les lipides fournissent la majorité des calories nécessaires pour assurer le bon développent des nouveau-nés. La digestion lipidique est initiée par la Lipase Gastrique humaine (LG) qui joue un rôle central dans la digestion néonatale. La LG semble pouvoir attaquer les Globules Gras natifs du lait (GG) malgré leur structure supramoléculaire complexe (ᴓ 0,1-10 µm, moyenne  4 µm)  et leur membrane tricouche protectrice (e ~ 15 nm). L’action de la LG (ᴓ ~ 5 nm) sur ce substrat naturel n’a jamais été étudiée en détail et aucune donnée n’est publiée sur la capacité d’insertion de cette enzyme dans la membrane tricouche du GG.   Cette étude vise donc à immunolocaliser la LG pendant l’hydrolyse des GG natifs et à préciser sa distribution à la surface du substrat par deux techniques microscopiques complémentaires de résolutions croissantes : microscopie confocale (MC, Nikon C1Si - microscope TE2000-E, lasers argon 488 nm, He-Ne 543 et 633, obj 60) et microscopie électronique à transmission (MET, JEOL 1400 120KV). Un substrat modèle du lait bovin contenant des GG natifs est utilisé. Pour l’approche en MC, ce substrat a été soumis à un protocole de digestion semi-dynamique simulant la phase gastrique du nouveau-né (descente en pH et concentration enzymatique) avec marquage des protéines, lipides apolaires et lipides membranaires par des sondes commerciales. Le phénomène d’agrégation acide des GG sans perte de leur structure a été mis en évidence. Des digestions statiques complémentaires avec marquage des lipides membranaires et immunomarquage de la LG après 5 min d’hydrolyse (Ac I anti-LG polyclonal hôte lapin, Ac II anti-IgG (H+L) lapin hôte âne) ont révélées des zones d’adsorption de la LG aux interfaces des GG et une adsorption favorisée aux pH bas (3-4). Pour préciser l’insertion membranaire de la LG, la digestion a été répétée à pH optimum (4) et soumis à un protocole d’observation MET : avec immunomarquage à l’or de la LG  (Ac II anti-IgG Lapin marquage or 6 nm hôte chèvre) en pré-inclusion. Ce protocole a confirmé des zones d’insertion de 2-5 molécules de LG au sein de la membrane et la présence de produits de lipolyse à l’intérieur des GG. Des répétitions des observations MET à différents temps d’hydrolyse et une approche en AFM compléteront cette description de la distribution de la LG au cours de l’hydrolyse de ce substrat essentiel pour la nutrition néonatale.</p>
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