Analyse des mutations KRAS dans les cancers colorectaux métastatiques : Optimisation des techniques et des délais pour la sélection rationnelle d'une première ligne thérapeutique - Archive ouverte HAL Accéder directement au contenu
Communication Dans Un Congrès Annales de Pathologie Année : 2011

Analyse des mutations KRAS dans les cancers colorectaux métastatiques : Optimisation des techniques et des délais pour la sélection rationnelle d'une première ligne thérapeutique

Résumé

L'analyse des mutations KRAS est un paramètre primordial dans l'individualisation de la prise en charge thérapeutique des cancers colorectaux métastatiques (CCRm), notamment dans la sélection de la première ligne thérapeutique pouvant comporter un anticorps anti-EGFR. L'optimisation de cette analyse repose sur la mise en œuvre de techniques de biologie moléculaire robustes et rapides permettant la réduction des délais de transmission des résultats d'analyse. L'étude porte sur 790 CCRm analysés entre janvier 2008 et décembre 2009. Après prescription de la recherche de mutations KRAS, les échantillons tumoraux fixés et inclus en paraffine ont été transmis par les pathologistes hospitaliers ou privés ayant assuré le diagnostic dans un délai moyen de 7,5 jours. Après analyse histopathologique (coloration HES), les échantillons ont été macrodisséqués pour assurer un contenu en matériel tumoral supérieur à 20 %. L'ADN est ensuite extrait à partir de 5 coupes de 10 μm d'épaisseur. Les mutations KRAS (codons 12 et 13 de l'exon 2) ont été recherchées par 3 techniques : 2 techniques " rapides " HRM (high resolution melting), discrimination allélique (PCR TaqMan) et une " lente " PCR-RFLP avec double digestion enzymatique. Sur les 790 échantillons, une corrélation statistiquement significative est observée entre les 3 techniques (κ > 0,9, p < 0,001). Une dégradation excessive de l'ADN empêchant l'analyse a été observée dans 2,8 % (22/790) des cas. Les mutations KRAS recherchées ont été détectées dans 40,6 % (310/768) des échantillons analysables, 82,3 % (255/310) au niveau du codon 12 et 18 % (55/310) au niveau du codon 13. Parmi les 549 échantillons pour lesquels les 3 techniques ont été utilisées, 15 cas (2,7 %) de discordance entre les 3 techniques ont été relevés. Dans ces cas, la répétition de la procédure complète, à partir de l'extraction de l'ADN a révélé que 47 % des discordances étaient imputables à la RFLP, 36 % à la technique TaqMan, 18 % à l'HRM. À partir de ces résultats, afin de réduire la durée de l'analyse et de mettre à la disposition des prescripteurs le résultat dans un délai optimal, l'HRM et la PCR TaqMan ont été utilisées en première intention et la PCR-RFLP en recours, en cas de discordance. Cette nouvelle procédure a permis d'assurer la transmission des résultats en 8,5 jours en moyenne contre 10,5 jours pour l'ancienne procédure. Cette procédure optimisée permet aux prescripteurs envisageant le recours à un anticorps anti-EGFR en première ligne, d'effectuer ce choix sur une base rationnelle c'est-à-dire en disposant du statut KRAS.

Domaines

Cancer
Fichier non déposé

Dates et versions

hal-00747865 , version 1 (02-11-2012)

Identifiants

Citer

Anne-Sophie Chrétien, Alexandre Harlé, Magali Meyer-Lefebvre, Marie Rouyer, Marie Husson, et al.. Analyse des mutations KRAS dans les cancers colorectaux métastatiques : Optimisation des techniques et des délais pour la sélection rationnelle d'une première ligne thérapeutique. Carrefour Pathologie 2011, Nov 2011, Paris, France. pp.CDROM, ⟨10.1016/j.annpat.2011.09.039⟩. ⟨hal-00747865⟩

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