Comparaison des extractions MEPS et SPE pour la quantification par LC-MS/MS d'androgènes et d'oestrogènes sous forme libres et conjugués dans du sérum de rat. - Archive ouverte HAL Accéder directement au contenu
Communication Dans Un Congrès Année : 2011

Comparaison des extractions MEPS et SPE pour la quantification par LC-MS/MS d'androgènes et d'oestrogènes sous forme libres et conjugués dans du sérum de rat.

Résumé

La réglementation REACH a pour objectif d'améliorer le niveau de protection de la santé et de l'environnement. Ainsi, depuis le 1er juin 2007, les substances sont classées selon leurs propriétés physico-chimiques, toxicologiques et environnementales. Leur pouvoir de bioaccumulation, leur persistance dans l'environnement, ou encore leur toxicité pour la reproduction sont alors étudiés. Dans ce sens, certaines substances sont qualifiées de perturbateurs endocriniens. Ce terme désigne en fait des substances qui interférent avec les fonctions du système hormonal. Selon REACH, ces substances sont considérées comme des substances extrêmement préoccupantes du fait de leur toxicité pour la reproduction. Ainsi, certains composés tels que le bisphénol A, l'atrazine, la vinclozoline ou encore l'HPTE sont suspectés d'être des perturbateurs endocriniens. Afin d'étudier directement ces derniers, des études sont menées pour établir une relation de causalité entre l'exposition aux perturbateurs endocriniens et certaines maladies. Dans ce contexte, en collaboration avec l'INERIS (Institut National de l'Environnement industriel et des RISques), l'impact de ces perturbateurs endocriniens (bisphénol A, atrazine, vinclozoline, HPTE) sur le système hormonal est étudié par la mesure in vivo de la balance androgènes / oestrogènes. Pour cela, les fractions libres et les fractions conjuguées des hormones sexuelles dans le sérum sont détectées et quantifiées par LC-MS/MS. Les molécules recherchées sont alors la testostérone (T) et l'androstènedione (A) pour les androgènes, l'oestrone (E1) et la 17-ß-oestradiol (E2) pour les oestrogènes ainsi que les métabolites sulfo- et glucuro-conjugués de ces derniers. De plus, les pesticides auxquels sont exposés les espèces d'études (rats adultes mâles et femelles) sont aussi dosés pour établir la relation de causalité supposée. Deux techniques d'extraction ont alors été développées : la première innovante permet de minimiser les quantités de matrice et solvants, il s'agit des MEPS (C18) (Micro- Extraction sur Phase Solide) et la seconde plus classique, la SPE (Oasis HLB). Le choix de la méthode d'extraction repose sur divers critères, à savoir, les rendements, la linéarité, la LOD-LOQ et l'effet matrice. Les deux techniques permettent de travailler sur une large gamme de linéarité (de 1 à 2000 ppb) et présentent des LOD allant de 0,2 à 1 ppb et des LOQ de 1 ppb à 20 ppb. Des rendements de 60% à 84% ont été obtenus sur SPE pour tous les composés, les résultats sont similaires avec les MEPS à l'exception des métabolites conjugués (13 à 40 %). Afin de pouvoir étudier sélectivement ces métabolites glucuronidés et sulfatés, de nouvelles phases MEPS devront être développées. Les effets de matrice constatés sont corrigés par étalonnage interne. Cette comparaison permet donc de choisir la méthode d'extraction optimale par SPE, fiable et répétable, qui sera appliquée aux 400 échantillons de sérum de rats adultes.
Fichier non déposé

Dates et versions

hal-00591980 , version 1 (10-05-2011)

Identifiants

  • HAL Id : hal-00591980 , version 1

Citer

Mikaël Tournier, Charlène Pouech, Agnèta Kiss, Florent Lafay, Robert Baudot, et al.. Comparaison des extractions MEPS et SPE pour la quantification par LC-MS/MS d'androgènes et d'oestrogènes sous forme libres et conjugués dans du sérum de rat.. SEP 2011 - 9ème congrès francophone de l'AfSep sur les sciences séparatives et les couplages, Mar 2011, Toulouse, France. ⟨hal-00591980⟩
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