Introduction Au cours du vieillissement, d'un exercice, d'une exposition aux UV ou de différentes formes de stress, la production d'espèces oxygénées (O2.-, H2O2, radicaux libres, peroxides) est augmentée. Celle-ci conduit à des altérations au niveau de l'ADN, à l'oxydation de lipides polyinsaturés et d'acides aminés au niveau des protéines. Ces lésions peuvent conduire à des modifications des fonctions cellulaires. Les technologies de téléphonie et communication sans fil émettent des champs électromagnétiques dans la gamme des radiofréquences (RF). Cet environnement électromagnétique génère des craintes quant aux conséquences possibles sur la santé. La production d'espèces oxygénées étant identifiée comme marqueur de stress, nous avons étudié les effets d'un signal EDGE sur leur production et dans les trois principaux types de cellules nerveuses (neurones, astrocytes et microglies) en culture. A notre connaissance, peu d'études in vitro ont porté, à ce jour, sur les effets d'une exposition RF sur la production d'espèces oxygénées (1-4). Matériels et Méthodes Modèles cellulaires et conditions de cultures Trois lignées cellulaires d'origine humaine ont été choisies : SH-SY5Y (lignée neuronale), U87 (lignée astrocytaire) et CHME5 (lignée microgliale). Les cellules sont cultivées selon les recommandations du fournisseur, respectivement 24 et 48 heures avant une exposition de 24 heures ou d'1 heure à un signal EDGE à 1800 MHz. Système d'exposition et conditions d'exposition Les expositions in vitro au signal EDGE sont réalisées à l'aide d'un guide d'onde SXC-1800 (Fondation IT'IS, Zürich, Suisse). Deux guides d'onde (exposé et factice) sont placés dans un incubateur commercial qui assure des conditions environnementales constantes (37°C, 5% CO2, 95% humidité). Six boîtes de pétri peuvent être exposées simultanément. Les cellules sont exposées à 0, 2 et 10 W/kg pendant 1 heure et 24 heures. La production de H2O2 est mesurée immédiatement après l'exposition de 24 heures ou 24 heures après l'exposition d'une heure. Pendant l'exposition, la température est contrôlée à 37 ± 0.1°C. Tous les échantillons sont codés avant l'exposition et les codes ne sont révélés qu'à la fin de l'analyse de toutes les séries d'expériences. Mesure du stress oxydant La mesure du stress oxydant est réalisée grâce au DCFH-DA (2'-7' dichlorofluoresceine diacétate) (Sigma) qui est un composé non fluorescent qui diffuse dans les cellules et est hydrolysé par les estérases intracellulaires en dichlorofluoresceine (DCFH). Ce dernier composé réagit notamment avec l'H2O2 pour former la dichlorofluorescine (DCF) fluorescente. L'analyse est faite par cytométrie en flux (FacsCanto II, Becton Dickinson). Pour cela, les cellules sont incubées, dès la fin de l'exposition ou après la période de récupération, pendant 30 min à 37°C en présence de 5 µM DCFH-DA. Les cellules sont grattées, centrifugées (1000 tpm, 5 min) et le culot est repris dans 1 ml de solution saline pour l'analyse en cytométrie de flux. La production excessive de H2O2 peut être obtenue avec la roténone utilisée comme contrôle positif. Pour cela, les différents types cellulaires sont incubés en présence de 5 µM de roténone (Sigma) pendant 16 heures. Résultats Les expositions et les analyses sont en cours. Les résultats seront présentés au congrès. Références 1. M. Zmyślony, P. Politanski, E. Rajkowska, W. Szymczak and J. Jajte. Acute exposure to 930 MHz CW electromagnetic radiation in vitro affects reactive oxygen species level in rat lymphocytes treated by iron ions.. Bioelectromagnetics. 25, 324-328 (2004). 2. O. Zeni, M. Romanò, A. Perrotta, M. B. Lioi, R. Barbieri, G. d'Ambrosio, R. Massa and M. R. Scarfì. Evaluation of genotoxic effects in human peripheral blood leukocytes following an acute in vitro exposure to 900 MHz radiofrequency fields.. Bioelectromagnetics. 26, 258-265 (2005). 3. M. Lantow, M. Lupke, J. Frahm, M. O. Mattsson, N. Kuster and M. Simko. ROS release and Hsp70 expression after exposure to 1,800 MHz radiofrequency electromagnetic fields in primary human monocytes and lymphocytes.. Radiat Environ Biophys. 45, 55-62 (2006). 4. M. Lantow, J. Schuderer, C. Hartwig and M. Simkó. Free radical release and HSP70 expression in two human immune-relevant cell lines after exposure to 1800 MHz radiofrequency radiation.. Radiat Res. 165, 88-94 (2006)